pcr引物怎么獲得基因(pcr引物是從哪邊連接)
1. pcr引物是從哪邊連接
主要原因是目前依賴于酶的DNA復(fù)制（合成）只能沿5'到3'方向，故PCR擴(kuò)增的引物需要在目的片段的兩側(cè)（末端），為合成提供游離的3'羥基，這樣能保證PCR產(chǎn)物說細(xì)了就是兩個相鄰堿基，一個屬前一個外顯子，一個屬后一個外顯子。
2。擴(kuò)增子序列包含如上這兩個堿基，則滿足“跨外顯子接頭區(qū)”。
3。技術(shù)上來說只跨過去一個堿基還嫌少了點(diǎn)，因?yàn)橐粋€堿基不同的情況下，仍能夠有擴(kuò)增反應(yīng)，即是說特異性不夠。但理論上來說以上兩點(diǎn)就說清楚了。
2. pcr技術(shù)引物從哪一端連
引物的延伸是從3′端開始的，不能進(jìn)行任何修飾。3′端也不能有形成任何二級結(jié)構(gòu)可能，除在特殊的PCR（AS-PCR）反應(yīng)中，引物3′端不能發(fā)生錯配。
引物的5′端限定著PCR產(chǎn)物的長度，它對擴(kuò)增特異性影響不大。因此，可以被修飾而不影響擴(kuò)增的特異性。引物5′端修飾包括：加酶切位點(diǎn)；標(biāo)記生物素、熒光、地高辛、Eu3+等；引入蛋白質(zhì)結(jié)合DNA序列；引入突變位點(diǎn)、插入與缺失突變序列和引入一啟動子序列等。
3. pcr引物從哪一段開始結(jié)合
這要看你所設(shè)計(jì)的引物了，引物不同，它結(jié)合的位置也不同。在pcr中，94度的變性使dna雙鏈成為單鏈，50度左右的復(fù)性使引物結(jié)合到模板鏈上，復(fù)性溫度要根據(jù)引物的tm值。所以引物不是說只與首末端結(jié)合。
PCR過程基本為變性，退火，延伸；溫度高時，DNA變性，雙鏈解開；溫度降低，引物與DNA結(jié)合（溫度降低時，DNA鏈復(fù)性，單鏈變雙鏈，引物過量，DNA與引物通過堿基互補(bǔ)配對原則識別結(jié)合），之后在taq酶作用下進(jìn)行延伸。
4. pcr過程中引物的作用是什么
一小段寡聚的DNA，一般有兩個（一對），分為上游引物和下游引物，分別指導(dǎo)DNA兩條鏈的聚合。它們主要作用有兩個，一個是和模板特異性結(jié)合來指導(dǎo)taq聚合酶合成所要的片段。一個是提供一個3‘端的－OH末端，只有擁有一個－OH末端，DNA聚合酶才能合成DNA。
在體內(nèi)是由小段的RNA來提供的，在體外PCR試驗(yàn)中則用DNA，因?yàn)镈NA比RNA穩(wěn)定易于儲存。
5. pcr中引物從哪一端開始復(fù)制
發(fā)生于復(fù)制階段。
一個引物與靶區(qū)域一端的一條DNA模板鏈互補(bǔ)。引物為人工合成的兩段寡核苷酸序列，一個引物與靶區(qū)域一端的一條DNA模板鏈互補(bǔ)，另一個引物與靶區(qū)域另一端的另一條DNA模板鏈互補(bǔ)，其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點(diǎn)，核酸聚合酶可由其3端開始合成新的核酸鏈。PCR引物設(shè)計(jì)的目的是找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地?cái)U(kuò)增模板DNA序列。如前述，引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到PCR的特異性與成功與否。對引物的設(shè)計(jì)不可能有一種包羅萬象的規(guī)則確保PCR的成功，但遵循某些原則，則有助于引物的設(shè)計(jì)。
6. pcr引物在哪一端
PCR中任何一條鏈的合成都是從5端向3端進(jìn)行的.
解鏈時,母鏈變?yōu)閮蓷lDNA單鏈,上下游引物分別和兩條單鏈結(jié)合,然后,從引物的3端開始,以從5端到3端的方向合成子鏈.
7. pcr的引物連接的是哪一端
在目的基因兩側(cè)。
因?yàn)镻CR擴(kuò)增的是包含引物在內(nèi)的引物間的片段，如果不在引物兩側(cè)設(shè)計(jì)引物，將導(dǎo)致得不到完整的待擴(kuò)增片段。
引物不會在目的基因中，它是一段與DNA互補(bǔ)的RNA鏈，而且與目的基因之外的兩端互補(bǔ)。要是與目的基因中的序列互補(bǔ)，PCR出來的基因就會是不完整的。
8. pcr引物工作原理
PCR引物又稱為寡核苷酸引物，也就是RNA，是由人工合成的，分為兩種，引物1和引物2。由于DNA聚合酶只能從核苷酸鏈的5'端到3'端進(jìn)行復(fù)制，也就是只能識別3'的尾端。
而且只能把核苷酸連到已經(jīng)和DNA模板互補(bǔ)產(chǎn)生的多核苷酸鏈上，所以引物1和2分別于雙鏈DNA的兩條鏈的尾部（就是末尾是3'端的那一邊）結(jié)合，為那些脫氧核苷酸提供3'的末端，就相當(dāng)于開了個頭。然后在DNA聚合酶的作用下合成兩條新鏈。而那段引物就成了新鏈的一部分。
強(qiáng)推
